静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达、纯化与结晶

摘要 表达、纯化静水椎螺（Lymnaea stagnalis）乙酰胆碱结合蛋白（Ls-AChBP）并得到晶体。将静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白cDNA 序列克隆到表达载体pFastBac1上，构建了重组表达质粒pFastBac1-Ls-AChBP-His，经重组子筛选，得到重组杆状病毒质粒Bacmid，采用CellfectinⅡ脂质体，把带有外源基因的杆状病毒质粒Bacmid 转染到昆虫细胞中，经镍柱和凝胶色谱柱对重组蛋白进行纯化得到五聚体，并用机器人进行结晶筛选获得其蛋白晶体。重组蛋白Ls-AChBP在Bac-to-Bac表达系统中得到高效表达并被纯化，结晶筛选得到晶体