尼罗罗非鱼Hepcidin成熟肽的cDNA克隆及真核表达载体的构建

摘要 Hepcidin是一类由动物肝脏细胞表达，具有调节铁代谢功能并具有抗菌作用的小分子阳离子抗菌肽，富含半胱氨酸，它们在机体免疫系统中发挥了重要作用，被认为是抗生素的理想替代品。TH1-5属莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）3种Hepcidin cDNA序列中的一种。参考莫桑比克罗非鱼Hepcidin TH1-5的cDNA序列，以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）肝脏Hepcidin全长 cDNA为模板，通过PCR扩增到编码22个氨基酸的类似于TH1-5的尼罗罗非鱼Hepcidin成熟肽片段“mTH”；通过设计含Xba I和Xho I酶切位点以及信号肽酶切位点的引物，将目的片段成功连接至pGAPZ-A真核表达载体，并转化进毕赤酵母菌GS115。经鉴定，重组真核表达载体“pGAPZ-A-mTH”已被成功构建，目的片段已整合进酵母染色体中