小鼠精原细胞分化的蛋白质组学研究

摘要 对小鼠睾丸中未分化（Undifferentiated）和分化中（Differentiating）的两类精原细胞进行定量蛋白质组研究,探讨两类精原细胞蛋白质组的表达差异,探索与精原细胞分化相关的蛋白质。利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1+细胞和c-Kit+细胞分别作为未分化和分化中的精原细胞分选出来,其中Thy1阳性细胞3组,c-Kit阳性细胞4组,分别代表了未分化精原细胞和分化中的精原细胞。采用高效液相色谱串联质谱方法（LC-MS/MS）分析两类细胞蛋白表达差异。并且对两类细胞的差异蛋白进行基因本体（Gene ontology,GO）功能注释、KEGG代谢通路和聚类分析。质谱分析共鉴定了3 228种蛋白,其中有256种蛋白在两类细胞中表达差异。其中,差异蛋白的富集分析发现,在生物过程方面,注释结果显示差异蛋白主要在代谢过程（Primary metabolic process）,细胞代谢过程（Cellular metabolic process）,分子代谢过程（Macromolecule metabolic process）和氮化合物代谢过程（Nitrogen compound metabolic process）中富集;在细胞组分方面,蛋白主要富集在细胞（Cell part）、细胞内组分（Intracellular part）和细胞器（Intracellular organelle）中;在分子功能方面,鉴定到的蛋白主要参与蛋白结合（Protein binding）、核苷结合（Nucleotide binding）、水解酶活性（Hydrolase activity）和核酸结合过程（Nucleic acid binding）。 基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路注释结果显示：88个蛋白质在KEGG通路分析数据库中有功能注释,共参与了18条代谢通路,其中,最主要的代谢通路是剪接体（Spliceosome）和泛素介导的蛋白水解作用（Ubiquitin mediated proteolysis）。获得小鼠睾丸中未分化和分化中的两类精原细胞蛋白质组表达谱,揭示精原细胞分化的蛋白质组的组成、筛选出差异蛋白