河鲈RAPD-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

摘要 以河鲈为研究材料，对河鲈RAPD-PCR的反应体系进行优化和适用引物的筛选，采用正交设计方法，选用L17（54）正交表，以河鲈基因组DNA为模板，对影响PCR反应较大的4个因素：Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物在5个水平上进行优化试验，得到河鲈最优RAPD-PCR反应体系：25 μL反应体系中含有30 ng DNA模板1.5 μL，10 μmol/L引物0.7 μL，10×buffer 2.5 μL，25 μmol/L dNTPs 0.4 μL，5 U Taq酶0.2 μL，2.5 mmol/L MgCl2 3.0 μL；利用优化体系从50条引物中筛选得到10条适用引物，并确定了引物的最佳退火温度