家蝇核糖体蛋白S18基因的克隆及表达模式研究

摘要 旨为证实核糖体蛋白S18(Ribosomal protein S18，RPS18)基因在家蝇体内的表达稳定性。从构建家蝇幼虫 cDNA 文库中筛选到核糖体蛋白S18基因，以cDNA为模板，通过 PCR 扩增，获得RPS18基因完整编码序列(登录号：KT006855)，运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建 pET28a/RPS18重组质粒，转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化，制备多克隆抗体并进行抗血清特异性分析。应用RT-PCR、qPCR及Western-blot从转录、翻译水平上分析RPS18基因在家蝇不同发育时期和三龄幼虫不同组织中的表达情况。结果表明，RPS18基因ORF全长459 bp，编码152个氨基酸，理论分子量为17 590.5 Da，等电点为10.48；将构建的重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)中，纯化得到RPS18蛋白；将该纯化蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体，His单抗鉴定及抗血清特异性分析显示，其均可见单一条带；RT-PCR、qPCR及Western-blot分析表明，RPS18基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均能够稳定表达；综合分析表明，该基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均保持较好的表达稳定性