Pseudomonas sp. 101甲酸脱氢酶基因的合成、表达及定点饱和突变

摘要 甲酸脱氢酶(FDH)是氧化还原酶辅酶NAD+和NADH再生循环体系中的关键酶，具有重要的应用价值和产业化应用前景。通过采用重叠延伸PCR技术，人工合成编码FDH的基因fdh，构建原核表达载体pET30a-fdh，以E.coli BL21(DE3)为表达宿主，获得了能可溶性表达的甲酸脱氢酶的重组菌；经16℃ IPTG诱导表达，重组酶的比活力为8.7 U/mgPro；为了提高FDH的稳定性，采用融合PCR方法对fdh基因进行了定点饱和突变，经筛选，获得了酶活未变但稳定性有所提高的突变酶Cys146AlaCys354Ala，其稳定性比野生酶提高了2.5倍