P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响

摘要 构建PcDNA3.1/necdin 真核表达载体并制备稳定过表达Necdin 的P19 细胞克隆，检测稳定过表达Necdin 对P19 细胞增殖的影响。从正常培养P19 细胞提取RNA 反转录成cDNA， 以此作为PCR 模板扩增得到necdin 目的基因，插入PcDNA3.1 载体的EcoR Ⅰ 和Xho Ⅰ 位点；脂质体法将构建的真核表达载体PcDNA3.1/necdin 转染P19 细胞，G418 筛选后挑取细胞单克隆， Western 印迹鉴定细胞单克隆中Necdin 的表达水平。CCK-8 法检测过表达necdin 对P19 细胞增殖的影响。成功构建PcDNA3.1/ necdin 真核表达载体并获得稳定高表达Necdin 的P19 细胞克隆，检测发现P19 细胞过表达Necdin 后其细胞增殖未发生明显变化。P19 细胞稳定过表达外源Necdin 对其细胞增殖无明显影响