Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响

摘要 旨在构建Neuritin 的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin 蛋白，研究其神经生物学功能。PCR 扩增编码neuritin 基因cDNA 序列，并纯化回收，通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K 中，转化大肠杆菌DH5α，neuritin-pPIC9k 重组质粒经PCR 与测序鉴定后，使用Sal Ⅰ 酶切使其线性化，电击转化酵母菌GS115， 经筛选与鉴定，成功构建了Neuritin 的毕赤酵母表达系统。结果表明，使用甲醇诱导其表达，SDS-PAGE 和Western blot 分析得到11 kD 的Neuritin 蛋白，纯化的Neuritin 蛋白加入PC12 细胞培养液中，能促进其突起的生长