小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析

摘要 为研究小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端缺失片段活性，以小鼠基因组DNA 为模板，通过聚合酶链式反应（PCR） 扩增4 条不同长度的小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端系列缺失片段，双酶切后克隆入pGL3-Basic 荧光素酶报告基因载体，构建Dnmt1 启动子-pGL3-Basic 重组质粒。随后经脂质体转染入NIH/3T3 细胞并检测各缺失片段荧光素酶活性。结果表明，成功构建Dnmt1 启动子5' 端系列缺失片段-pGL3-Basic 荧光报告基因重组质粒。经双荧光素酶报告基因检测后发现，所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性， 且最长缺失片段Dnmt1-1-pGL3-Basic 活性最强，约为其他的3 倍左右。结果初步证明小鼠Dnmt1 启动子在-1 866-+57 bp 区域具有较强转录活性