家蝇伴侣蛋白TCP-1基因的序列分析、克隆及诱导表达

摘要 旨在对EST筛选得到的家蝇伴侣蛋白TCP-1（MD-TCPⅠ）基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中诱导表达。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MD-TCP Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR的方法进行扩增,以pET-28a（+）为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导表达。表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果显示,MD-TCP Ⅰ基因ORF全长753 bp,编码250个氨基酸,理论分子量27.07 kD; 等电点5.92,该序列编码的蛋白属于热休克蛋白60家族的TCP。构建了正确基因序列MD-TCP Ⅰ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达