11种（株）食源性细菌基因芯片检测方法的建立

摘要 建立多重PCR反应结合基因芯片技术的11种（株）食源性致病菌检测方法。以金黄色葡萄球菌、志贺菌、霍乱弧菌、单增李斯特菌等11种（株）食源性细菌的特异性基因为靶基因，利用Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计引物和探针，BLAST比对分析特异性。寡核苷酸探针点制醛基玻片制备基因芯片，13对引物分为3组扩增，PCR产物混合后与基因芯片杂交检测。鼠伤寒沙门菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌等11种（株）细菌使用该方法检测均能准确鉴定，基因组DNA灵敏度为10--100 pg，6组模拟DNA混合样本芯片检测结果与预期一致，18株沙门菌临床分离株检测均为阳性。从样本PCR扩增开始至检测完成，整个操作时间不超过3 h。该方法能够对11种（株）食源性致病菌快速准确鉴定，可以满足部分食源性致病菌通量检测的要求，具有较好的临床应用前景