新疆南部和田羊、卡拉库尔羊、多浪羊MSTN基因的真核表达

摘要 旨在构建新疆南部4个地方品种（品系）绵羊，即平原型和田羊（HP）、山区型和田羊（HS）、卡拉库尔羊（KL）和多浪羊（DL）的肌生成抑制素（myostatin，MSTN）基因与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的融合表达质粒并在真核细胞中表达。从4种绵羊骨骼肌中提取总RNA，逆转录获得cDNA，PCR扩增MSTN后与pMD18-T载体连接构建重组质粒并测序分析，然后将MSTN（HP、HS、DL和KL）基因插入到融合表达载体pEGFP-N1中，构建真核融合表达重组质粒pEGFP-N1-MSTN，在细胞铺满80%时用脂质体法转染到CHO中，观察EGFP与MSTN蛋白在CHO细胞内融合表达的绿色荧光。结果显示，平原型和田羊、山区型和田羊、卡拉库尔羊和多浪羊MSTN的ORF序列都是1 125 bp（不含终止密码子），编码375个氨基酸；与GenBank中MSTN序列比较，与田羊（HS、HP）没有差异；卡拉库尔羊有2个碱基差异，造成2个氨基酸变异；多浪羊有6个碱基的差异，造成4个氨基酸变异。成功构建EFGP和MSTN共表达重组质粒并在真核细胞CHO中得以表达