胃癌细胞中Rab25相互作用蛋白的鉴定及功能学研究

摘要 目的 通过串联亲和纯化联合质谱技术(TAP-MS)筛选胃癌细胞中Rab25相互作用蛋白。方法 利用慢病毒转染技术构建稳定表达StrepII-6His-EGFP-Rab25融合蛋白的SGC7901细胞系;通过StrepII-6His标签进行串联亲和纯化获得与Rab25相互作用的蛋白复合物,并通过质谱检测蛋白复合物的组成;随后构建了Rab25蛋白质相互作用网络,并通过免疫共沉淀技术验证其在胃癌细胞中相互作用的真实性。结果 通过TAP-MS技术共鉴定出26个Rab25的相互作用蛋白,主要参与癌症通路、微管运动、细胞凋亡、NOTCH通路等过程;运用免疫共沉淀方法验证了Itgb1与Rab25相互作用的真实性,并通过Transwell试验证实Rab25和Itgb1协同促进SGC7901细胞的侵袭。结论 通过鉴定胃癌细胞中Rab25的相互作用蛋白网络,为胃癌的治疗提供一个新的线索