重组禽腺联病毒介导的输卵管暂态生物反应器的初步研究

将输卵管特异表达启动子调控的人组织激肽释放酶（human tissue kallikrein,hKLK1）表达盒插入至AAAV转移载体pAITR中，与AAAV包装载体pcDNA-ARC及腺病毒辅助质粒pHelper三质粒利用磷酸钙沉淀法共转染AAV-293细胞，制备输卵管特异表达hKLK1的rAAAV。将获得的重组病毒以每只鸡2×1010病毒颗粒数翅静脉注射正常产蛋母鸡，RT-PCR结果显示hKLK1只在输卵管部位表达；酶活性检测结果表明：注射后第2天就可以检测到rhKLK1的活性，第3周表达量最高，达107.3U/ml，表达时间持续6周之久；用含rhKLK1的蛋清灌喂自发性高血压大鼠（SHR），可使其血压下降70mmHg，5天后回升到饲喂前水平。以上结果表明重组禽腺联病毒介导的鸡输卵管暂态生物反应器不仅具有很好的组织特异性，而且可指导外源基因长期稳定的表达