集胞藻6803NdhO蛋白多克隆抗体制备及其初步应用

蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止,人们在蓝藻细胞中已鉴定出17种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhQ)。最近,人们还获得了NdhO亚基的缺失突变株。然而,人们对NdhO亚基的研究还不充份,至今仍不清楚它的功能角色。通过PCR扩增出集胞藻6803 NdhO亚基编码基因ndhO,构建表达质粒pET32a(+)-ndhO,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导表达、经His-tag纯化后免疫日本大耳白兔获得多克隆抗体。间接ELISA法揭示NdhO抗体效价可高达1 ∶ 1 025 000;蛋白免疫印迹确定该抗体具有高度特异性。应用该抗体进行蛋白免疫印迹检测,结果发现NdhO亚基仅存在于NDH-1活性复合体中。因此,NdhO多克隆抗体的获得将为进一步阐明该亚基所担任的功能角色奠定了生化基础