一种酿酒酵母附加型分泌表达载体pYES2/CT/α-factor的构建及鉴定

以pPIC9为模板，通过PCR扩增获得酿酒酵母的α-交配因子（α-factor），并克隆至酿酒酵母胞内表达载体pYES2/CT中，构建了一种新型酿酒酵母附加型分泌表达载体pYES2/CT/α-factor（pYCα）。再将甘露聚糖酶基因（mannase，man）通过酶切、连接克隆至pYCα的α-factor的下游，构建了pYCα-man重组载体检验pYCα的分泌性能和稳定性。结果显示α-factor可引导甘露聚糖酶基因在胞外分泌表达，在曲利本兰培养基上形成明显的水解圈，进一步分析重组菌胞外和胞内酶活，结果显示对照INVSc1/pYCα的两种酶活都未检测到，而INVSc1/pYCα-man具有明显的胞外酶活，未检测到胞内酶活，说明构建的pYCα具有良好的分泌性能；稳定性实验表明重组质粒连续培养150 h仍具有良好的稳定性