构建噬菌体展示抗体库过程中电穿孔法的条件优化

目的：确定稳定且高效的电转化实验方案以达到构建高库容噬菌体展示抗体库的目的。方法：探索电压、脉冲时间、噬菌粒DNA质量与浓度、TG1大肠杆菌的生长周期、重悬洗涤缓冲液及培养基优化等方面对TG1大肠杆菌电转化效率的影响。结果：当电转杯电极间距为2mm时,设定电转仪参数为3kV、25μF、5ms、200Ω;外源DNA经纯化后加入感受态菌液中使终浓度为1ng/μl;培养基中加入20mmol/L的MgCl2,并将TG1的生长阶段调控在OD600=0.8,用无菌超纯水重悬及洗涤细胞,将感受态细胞浓度调整为4×1010个/ml。在上述条件下,电转化效率可达到4.9×109CFU/μg DNA。结论：通过多种条件优化,提高了电转化效率,为构建高库容噬菌体展示抗体库建立了基础