猪抵抗素(resistin)的原核表达及表达产物的纯化鉴定

用PCR方法扩增到抵抗素基因(Resistin, RSTN)并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体，获得重组质粒pET-RSTN。将重组质粒转化大肠杆菌BL-21（DE3）感受态细胞，用IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果表明，重组resistin蛋白分子量大小约30kDa。对表达条件如温度、IPTG浓度及诱导时间进行优化并用SDS-PAGE检测。结果表明，30℃、4h、IPTG浓度为1mmol/L时，可溶性重组resistin的含量最高。表达产物经Western blot检测证实是Resistin蛋白，并用镍离子亲和层析的方法获得纯化的Resistin蛋白