A型流感病毒拯救中聚合酶基因的快速克隆与其酶活性检测

为了快速有效的克隆与鉴定流感病毒聚合酶基因活性，根据BsmB I、Bsa I等IIs型限制性内切酶切割位点位于识别位点下游4至8个碱基下游的特点，通过在PCR引物中引入该类限制内切酶位点，设计了6对引物，实现了对编码A型流感病毒聚合酶蛋白三个大基因片段PB2、PB1和PA的高效扩增。由于分别扩增的两段PCR产物以及流感病毒转录/翻译双向载体pHW2000经IIs型限制性内切酶酶切后能够进行定向克隆，从而极大的提高了目的基因片段的克隆效率。用两端分别带有流感病毒转录与翻译调控序列非编码区的绿色荧光蛋白报告基因质粒pHW72-EGFP检验聚合酶基因重组质粒的酶活性，加快了含有聚合酶基因重组质粒的筛选。实验结果表明此种克隆流感病毒聚合酶基因的方法简便、快捷，为流感病毒的快速克隆和拯救奠定了基础