地塞米松降解新基因的探讨

探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。 根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001(B.CQ001)全基因组测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因。提取B.CQ001总RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板,利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)验证筛选出的新基因,测序鉴定后连接原核表达载体pET-28a-c(+),构建重组质粒pET-28a-Ivd。将pET-28a-Ivd转化感受态B.CQ001,高效液相色谱(HPLC)验证表达菌降解能力的提升。 从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因,分别为ORF05499、ORF05827、ORF06535,其表达产物分别为过氧化物还原酶、甾酮异构酶、异戊酰辅酶A脱氢酶;RT-qPCR分析显示,3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调,基因ORF06535表达上调明显;在B.CQ001中过表达基因ORF06535,HPLC检测显示,表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%,相比原菌B.CQ001有明显提升。 在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535,并完成基因克隆和功能验证,为制备地塞米松及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息