铜绿假单胞菌SOS反应阻遏蛋白LexA的复性及活性研究

目的:对LexA蛋白复性方法进行优化，对复性后的LexA蛋白的生物学活性进行分析。方法:采用含有GSH/GSSG的缓冲液，一步稀释法对变性LexA蛋白进行复性，用镍离子亲合柱及阳离子柱层析法对复性后的LexA蛋白进行纯化，再以Sephadex G-25凝胶柱脱盐，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和RP-HPLC法检测复性效果，Western blot法分析复性前后及经DTT处理后的LexA蛋白的免疫反应性，凝胶滞留电泳试验检测复性LexA蛋白与DNA的特异性结合能力。结果:复性后的LexA蛋白出现单体和多聚体的形式，多聚体是由单条肽链聚合而成。LexA单体和多聚体与兔抗LexA多克隆抗体均有较好的反应性。复性后的LexA蛋白能与SOS盒序列发生特异性结合