人补体调节蛋白MCP、CD59共表达体系的构建及其功能研究

利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP，以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞，用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞。PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色体上，RT-PCR和Western印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人MCP和CD59在转化细胞中的共表达。 检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中，并未随着传代而丢失，为稳定的转双基因细胞系。 补体溶破实验表明， pcDNA3-MCPCD59-DP转染细胞由于人MCP和CD59的共表达获得了较MCP或CD59单一表达时更好的保护功效，能有效地保护NIH3T3细胞免受人补体的攻击，从而抑制补体依赖的细胞毒反应的发生。 以上结果表明本研究所构建的双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达，在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值