Gluconobacter oxydans木糖醇脱氢酶基因的克隆表达及木糖醇的转化分析

从氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)的基因组DNA上扩增出木糖醇脱氢酶基因xdh，构建了诱导型表达载体pSE-xdh，导入E.coli JM109后获得了高效表达木糖醇脱氢酶基因的重组菌JM109/pSE-xdh。通过HisTrap HP亲和层析和SephacrylS300分子筛两步纯化从细胞中得到纯酶，并对酶学性质进行研究。XDH最适还原反应的pH值为5.0，最适还原反应的温度为35℃；最适氧化反应的pH值为11.0，最适氧化反应的温度为30℃。重组菌中的XDH依赖NADH，对NADH的米氏常数Km=57.8 mmol/L，最大反应速率Vmax=1209.1 mmol/(ml·min)。重组菌的XDH酶活力为13.9 U/mg。利用重组菌和原始菌混合静止细胞转化D木酮糖，16 h 28.0 g/L D木酮糖生成16.7 g/L木糖醇，而原始菌单独转化只生成8.3 g/L木糖醇