RU486诱导调控载体的构建及体外表达

构建可经RU486诱导表达载体，并证实其对基因表达的调控作用。通过分子生物学技术，改造了含有GLP65反式作用调控因子和GAL4杂合启动子的PRS质粒。PCR扩增BGHpolyA片段，并引入需要的酶切位点。在GLP65调控区上游添加了hCMV启动子，在GAL4杂合启动子下游加入了荧光素酶报告基因。同时，为减少两个转录单元之间的潜在干扰，加入了1.2 kb的小鸡β珠蛋白绝缘子。经PCR和限制性酶切及测序证实了载体的正确性。在体外转染HEK293细胞后，运用双荧光素酶报告基因技术鉴定了该系统的调控能力。加入诱导剂RU486后，可以诱导表达荧光素酶，并在一定范围内两者呈正比，最高可以实现荧光素酶的40余倍的表达，而没有RU486时，几乎没有报告基因的表达，表明RU486诱导调控载体构建成功，可实现对目的基因的表达时间和表达水平的精确调控，为进一步的基因调控研究和和基因治疗提供了良好的工具