ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定

目的：构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体，并在293T细胞（人胚肾细胞）中实现表达。方法：通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1，构建重组真核表达载体pCMV－Myc－fat1，用脂质体法转染293T细胞，Western Blot检测fat1的表达，并用间接免疫荧光（IFA）确定其在293T细胞中的定位情况。结果：构建真核表达质粒pCMV－Myc－fat1，转染293T细胞后，可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论：成功构建真核表达质粒pCMV－Myc－fat1，可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达，为进行fat1的功能研究奠定了基础