K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶（PEL），获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体（ep8）,ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性，作者利用重叠延伸PCR法，以ep8基因为模板，将第202位赖氨酸突变为丙氨酸（K202A），构建表达质粒pAO815-ep8-K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8-K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15% SDS-PAGE 结果分析表明突变体分子量与野生型一致，约为28KD. 表达产物热稳定性分析结果表明: 野生型（PEL）的Tm值为39.03℃，而以野生型为模板进行定点突变得到的单点突变酶（PEL-lip07-K202A），其Tm却降低了2℃，为37.08℃。叠加突变酶(PEL-ep8-K202A)的Tm为41.66℃, 比野生型酶提高2.63℃，比随机突变体ep8生产的酶（PEL-ep8）的Tm提高了1.21℃