双重套式PCR对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试

目的:测定双重套式PCR微量扩增体系的灵敏度,为附植前遗传学诊断 (PGD)、家畜胚胎性别鉴定等提供技术保障。方法:以桑椹胚卵裂球为模板进行扩增,建立昆明白小鼠特异的SRY ZFX双重套式PCR性别鉴定体系。按卵裂球数量的不同分为五组,对应的卵裂球个数分别为 1、2、3、4、5及以上。根据有效扩增结果得出双重套式PCR的灵敏度。结果:第 1组 (卵裂球个数为 1 ),有效检出率为 85 % ( 34 /40 ),污染率为 7 5 % ( 3 /40 ),漏检率为 7 .5 % ( 3 /40 )。随着卵裂球个数的增多,有效检出率逐渐升高,而污染率和漏检率则呈逐渐下降趋势。第 5组 (卵裂球达到 5及以上 ),有效检出率达到 1 0 0 %,漏检率为 0。对于第 2、3、4、5组而言,有效检出率及漏检率各组间并无显著差异 (P >0 . 0 5 );而第一组与其它各组间,有效检出率及漏检率存在显著差异 (P <0 .0 5 )。结论:双重套式PCR可以有效扩增基因组DNA量约为 1 2pg的模板,且扩增片段为单拷贝片段