人Sema4C重组腺病毒载体的构建及其在小鼠成肌细胞系C2C12中的表达

利用Ad5腺病毒载体系统构建人Sema4C基因重组腺病毒表达载体并在成肌细胞系C2C12中表达，并初步探讨Sema4C基因在成肌发育过程中的可能作用。利用脂质体介导重组腺病毒载体转染HEK293细胞，包装出完整的腺病毒；将重组腺病毒载体感染C2C12成肌细胞后，利用激光共聚焦显微镜观察发现12h即有绿色荧光表达，24h后绿色荧光蛋白表达最强；流式细胞仪检测病毒的感染效率几乎达100%。WB检测结果表明感染重组腺病毒载体组C2C12细胞Sema4C蛋白的表达量明显高于空载体对照组（P<0.01）。为了进一步观察Sema4C基因对C2C12细胞增殖分化的影响，流式细胞仪检测了病毒感染48h后C2C12细胞的增殖指数，并对感染后诱导分化的C2C12细胞的分化情况进行了观察。我们的结果首次表明，过表达外源性人Sema4C基因不仅能使C2C12细胞的G0/G1期比例增加，细胞的增殖指数下降，同时在分化培养条件下还能促进C2C12细胞肌管的形成