重组Osx腺病毒载体的构建及其调控成骨细胞增殖与分化的作用

构建表达成骨相关转录因子Osx的腺病毒，观察Osx对原代培养的小鼠成骨细胞增殖与分化的调控作用。将Osx编码基因克隆入腺病毒载体pAdEasy中，经293A包装后得到重组腺病毒，感染原代培养的小鼠颅骨细胞，茜素红染色观察矿化程度，实时定量RT-PCR检测成骨相关标志基因的转录水平，流式细胞检测细胞周期的改变。结果发现，①得到的病毒滴度为2×109PFU/ml，最佳感染复数为50；②表达Osx并不能够促进成骨细胞的矿化；③定量RT-PCR表明表达Osx 1d、3d、6d后成骨分化标志骨钙素、骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显上调(p<0.01)；④流式细胞仪的结果表明Osx能够促进成骨细胞的增殖(p<0.01)。通过腺病毒在原代培养的成骨细胞中表达Osx能够促进成骨细胞的增殖，并对其分化具有一定的调控作用，为Osx在各种骨损伤的基因治疗应用方面提供了基础