CFP10-ESAT-6-MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定

目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统（baculovirus expression vector system，BEVS）中表达结核分枝杆菌蛋白CFP10-ESAT-6-MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因CFP10-ESAT-6-MPB64连接到pFastBac转移载体并转化DH10Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-CFP10-ESAT-6-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Spodoptera frugiperda（Sf9）细胞收获病毒，病毒转染细胞后收集上清通过Co亲和层析纯化得到目的蛋白。纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠并检测血清中特异性抗体滴度及PPD抗体，ELISA检测CFP10-ESAT-6-MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：CFP10-ESAT-6-MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90%以上，蛋白产量为42mg/L，纯化蛋白能有效刺激Balb/c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在1~50μg/ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用