蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定

摘要 Alfimeprase(ALF)是蛇毒纤溶酶Fibrolase的N端突变体，有纤溶活性而无出血活性。通过双酶切从克隆载体上获取目的基因alf，并将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZα A，经高效电转化、Zeocin筛选鉴定及培养条件pH、每天甲醇流加终浓度、菌体生长密度和甲醇诱导时间的优化，获得了重组ALF(rALF)高表达菌株pPICZ? A-alf / GS115，且在优化条件下rALF的最高产量达425 mg/L。通过His？bind柱纯化后，rALF纯度高达95 %，SDS-PAGE和Western blot分析表明rALF的分子量约为24 kDa，且能与一抗特异结合。纤维蛋白平板法纤溶活性鉴定结果进一步说明rALF获得了高活性分泌表达。这即为ALF的深入研究和工业化生产应用奠定了重要基础