硫色曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆、表达及酶学性质分析

根据GenBank中发表的木聚糖酶的氨基酸序列保守性和黑曲霉木聚糖酶基因序列设计引物，用RT-PCR的方法扩增并克隆硫色曲霉(Aspergillus sulphureus)的木聚糖酶基因xynB。序列分析表明，该基因全长678 nt，编码一24 kDa的蛋白，与已知黑曲霉xynB 基因的同源性均高于95%。将xynB基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中，转化大肠杆菌BL21，经过IPTG的诱导，获得了该基因的特异性表达。酶学性质分析表明，该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH值为4.4。在pH2.4的酸性条件下经过6 h酶活性仅下降13%。30~50℃保温30 min对酶的活性影响不大，但随着温度的升高，酶活逐渐降低，到80℃时还剩下47%的酶活，到90℃基本无催化能力。在反应体系中分别添加不同浓度Cu2+、Zn2+和Ca2+离子均可使酶活性下降，但幅度不大