人热休克蛋白70的制备与特性分析

热休克蛋白70（HSP70）是真核细胞在应急条件下诱导产生的一种主要热休克蛋白。目前已知其在细胞中主要发挥分子伴侣功能。HSP70分子有两个结构域，即位于N-端的ATP结构域和位于C-端的肽结合结构域。HSP70的核定位序列位于ATP结构域中。为了进一步深入研究HSP70的结构与功能的关系，本文克隆和表达了全长的人HSP70，并将其纯化至电泳纯。在此基础上，制备了分别去掉其中一个结构域和去掉了核定位序列的三个突变体，即去掉了ATP结构域的HSP70ΔATPBD，去掉了肽结合结构域的HSP70ΔPBD和去掉了核定位序列的HSP70ΔNLS。Western免疫印迹结果显示，纯化的HSP70、HSP70ΔATPBD、HSP70ΔPBD 、HSP70ΔNLS均能与人HSP70抗体反应而在PVDF膜上显出清晰的条带。用SDS-PAGE测定它们的分子量，HSP70和HSP70ΔNLS均为约70 kDa，HSP70ΔPBD为 52 kDa， HSP70ΔATPBD 为28 kDa，均与预测的分子量一致。用凝胶过滤测定其分子量，所得结果与电泳测定的相同，说明在所用缓冲液中，HSP70及其突变体都以单体形式存在。用所制备的HSP70、HSP70ΔATPBD、HSP70ΔPBD、HSP70ΔNLS在体外证明①HSP70在体外能与核仁素（C23，nucleolin）相互作用；②HSP70与核仁素相互作用的结构基础为其肽结合结构域