人CD46启动子真核表达载体的构建

为了构建人CD46（hCD46）启动子指导目的基因表达的真核表达载体，提取HeLa细胞基因组DNA，用PCR扩增出hCD46基因的启动子区域，序列分析结果表明其与GenBank中hCD46基因5’端某片段的同源性为99.9％。用此启动子替换pcDNA3EGFP中的CMV启动子，并在hCD46启动子和EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因第二内含子（RGI），得到的重组表达载体转染CHO和SP2/0两种鼠源细胞，流式细胞术检测表明CHO细胞EGFP的表达量高于SP2/0细胞，表达特性与人体CD46相似；RGI可以增强EGFP的表达量，但不改变其表达的组织特异性，提示克隆的hCD46启动子可以用于研制模拟人体CD46基因表达特性的转基因小鼠