pRNA导入型Ribozyme的设计和体外转录制备

目的:枯草杆菌的包装RNA分子pRNA是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶Ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因RNA的pRNA-Ribozyme。由于目前100 nt以上的RNA分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重组构建并体外转录制备170 nt的pRNA-Ribozyme。方法:依据pRNA序列和Ribozyme分子序列,采用PCR扩增和克隆重组,将pRNA-Ribozyme按照顺式连接开放式结构、和Ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构,制备其DNA质粒;再在体外转录制备pRNA-Ribozyme分子。结果:体外生物合成制备pRNA-Ribozyme顺式连接开放式结构、和Ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构pRNA-Ribozyme分子,它们能通过自身正确折叠形成聚合体结构。体外鉴定pRNA-Ribozyme对其靶mRNA均具有切割降解活性,为pRNA-Ribozyme分子的细胞内应用和在胞内表达应用打下基础