IBV核蛋白的表达纯化及在监测中应用

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）是禽类一种变异性很强的冠状病毒，为获得高度纯化的IBV核蛋白，建立监测IBV抗体的方法，通过RT-PCR从IBV中扩增IBV-N基因，定向连接到表达载体pGEX-KG中，转化E. coli BL21（DE3）菌株，诱导获得表达产物，SDS-PAGE分析产物大小、Western blot分析其免疫学活性，通过亲和层析法获得高度纯化的表达蛋白，建立一种检测IBV抗体的方法，并应用于临床监测。结果显示，IBV-N基因全长1230bp，GST融合蛋白表达产物大小约为80kDa，表达量约占菌体总蛋白的25%，具有良好的免疫学活性；通过GST亲和层析柱成功获得纯化蛋白，以该蛋白包被酶标板，成功地建立了一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法。研究表明重组N蛋白作为IBV诊断抗原，具有制备简便、特异性强、敏感性高、重复性好的特点，可用于该病的临床监测，为该病疫情监测、发病机制研究奠定了基础