PUMA-BH3结构域短肽的原核表达、纯化及促凋亡活性鉴定

Bcl-2家族蛋白质在线粒体途径凋亡的调控机制中起着重要的作用，p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein，PUMA)是该家族的一种只含有BH3同源区域的促凋亡蛋白。为得到PUMA的BH3结构域短肽并检测其生物学活性，将人工合成的编码PUMA-BH3肽的DNA片段克隆到质粒pTYB2上，构建出表达PUMA-BH3-内含肽-几丁质结合域融合蛋白的原核表达载体pTYB2-PUMA-BH3，转化大肠杆菌BL-21(DE3)中IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇（DTT）的柱内还原，直接获得可溶性PUMA-BH3肽。通过研究重组PUMA-BH3肽在体外条件下对线粒体活力、线粒体肿胀度以及细胞色素c释放的影响来鉴定其生物学活性。结果表明，获得的可溶性PUMA-BH3肽能作用于离体线粒体，引起线粒体活力降低，线粒体肿胀并能诱导细胞色素c释放。环孢菌素A对此有一定的抑制作用，提示PUMA-BH3肽对线粒体的上述作用是通过促进通透性转运孔( PTP)开放实现的。经原核表达及纯化，获得了具有促凋亡活性的PUMA-BH3肽，为进一步研制控制凋亡过程的药物奠定了基础