A和C结构域糖基化位点对凝血八因子的分泌及活性的影响

在血液来源和血液制品安全隐患制约下,基因工程重组凝血八因子已开始替代天然八因子用以治疗血友病等病症,但目前高效表达重组八因子的方法在我国仍有技术瓶颈.该项目利用定点突变技术,通过PCR、质粒抽提、转染以及产物检测这四个步骤来研究重组凝血八因子在A和C结构域添加糖基化位点对八因子表达及活性的影响.结果表明,在重组八因子A结构域Bip结合位点外端增加糖基化位点能够促进八因子的细胞外分泌量,而在Bip结合位点内的突变则不但大大减少了八因子的胞外分泌也使八因子活性几乎全部丧失.与A结构域不同,在八因子C结构域增加糖基化位点的结果表明,无论在蛋白C结合区之内或之外增加糖基化位点不但不能大幅提高八因子的胞外分泌,也使八因子活性基本丧失.这些结果说明只有在A结构域外缘的非Bip结合区进行糖基化改造,才有可能提高八因子分泌并保持其活性