siRNA联合沉默MMP-9和FAK基因对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭和迁移的影响

目的： 观察双基因联合干扰MMP-9和FAK对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭、迁移能力的影响。方法：分别构建pGV102-MMP9-siRNA，pGV102-FAK-siRNA重组质粒载体，脂质体TM2000介导转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞，实验分为空白对照组、Anti-MMP-9组，Anti-FAK组、Anti-MMP-9 &FAK组、阴性对照组。经G418筛选GFP+克隆，流式细胞仪分析阳性率，激光共聚焦观察转染后细胞形态，半定量RT-PCR检测各组B16F10细胞MMP-9和FAK基因的mRNA转录水平，Transwell侵袭、迁移实验测定各组B16F10细胞体外侵袭、迁移能力。结果： 经G418筛选，3个转染组阳性率分别为92.41±1.64%，95.72±0.21%，91.52±0.11%，且转染后细胞形态良好；与空白对照组相比，3个转染组的MMP-9，FAK mRNA转录水平下降明显（P<0.01），迁移、侵袭能力明显降低（P<0.01），但Anti-MMP-9 &FAK组细胞侵袭迁移能力显著低于Anti-MMP-9 组和Anti-FAK组（P<0.01）。结论： 相比单独沉默MMP-9 或FAK，联合沉默MMP-9 和FAK可明显降低小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移、侵袭能力