表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建

将禽流感病毒M2基因克隆于真核表达质粒pIRES-EGFP中，使其位于pCMV启动子的调控下，并与绿色荧光蛋白基因（EGFP）串联后，将上述串联基因插入到含MDV CVI988的非必需区US基因的重组质粒pUS2中，构建带标记的重组质粒，然后将此重组质粒转染感染了MDV CVI988的鸡胚成纤维细胞，利用同源重组的方法，筛选了表达禽流感病毒M2基因的重组病毒MDV1。经PCR、Dot-blotting，Western-blotting等实验的结果表明，禽流感病毒M2基因的确插入到MDV1（CVI988）基因组中并获得表达。重组MDV1免疫1日龄SPF鸡21天后，用ELISA可检测到M2蛋白的特异性抗体。接种了重组病毒rMDV的鸡体内针对H9N2疫苗血凝素的抗体滴度(p<0.05)明显提高，以禽流感病毒AIV A/Chicken/Guangdong/00（H9N2）攻毒后进行病毒重分离试验的结果发现，重组病毒能有效地降低病毒的排出量(p<0.01)，说明该重组病毒可以用于防制禽流感的免疫