重组人胰岛新生相关蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

摘要 目的：对胰岛新生相关蛋白（Islet neogenesis associated protein ,INGAP）进行表达、纯化，并检测其免疫活性。方法： INGAP基因片段插入表达载体pET22b(+)，在E.coli BL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8M尿素溶解，Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化，Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化，HPLC测定INGAP蛋白的浓度，将纯化的INGAP蛋白经注射途径免疫家兔，制备兔抗INGAP血清，采用免疫双扩、ELISA及Western Blot分析INGAP的免疫活性。结果INGAP以包涵体形式表达，表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白，经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98.81%，表达及纯化的INGAP具有良好的免疫活性