表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选

目的:构建及筛选高效表达原创性全人源抗人IgE单克隆抗体的重组工程细胞株.方法:将采用核糖体展示技术筛选到的原创性全人源抗人IgE单链抗体(scFv)基因改构设计为IgG1κ型全长抗体,构建重组真核表达质粒并电转染CHO-S细胞,Dot-blot法选取多株高表达克隆进行40ml摇瓶批次培养,再据细胞生长特征及抗体表达量选取高表达克隆进行40ml摇瓶及3L摇瓶流加培养研究,选取候选细胞株并对改构前后抗体的生物学活性进行比较研究.结果:成功构建了pMH3-H、pMH3-L、pCApuro-H、pCApuro-L四种重组真核表达质粒并成功共转染CHO-S细胞.完成了4次电转染8轮细胞克隆筛选,获得两株表达量较高的候选克隆Mab和Mab,在3L摇瓶流加培养中抗体表达量分别达到470mg/L及499mg/L.生物膜光干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)亲和力结果显示Mab1#及Mab2#两株单抗亲和力均达到nmol/L级(10-9),与现有唯一上市的抗人IgE单抗药物奥马珠单抗(Omalizumab)的亲和力相当.选取Mab1#全长抗体与其改构前的母本单链抗体的表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)中和活性比较结果显示Mab1#抑制hIgE与FcεRI结合的EC50为3nmol/L,EC90为9nmol/L,较改造前亲和力提高了4.3倍,中和活性(EC50)提高了23.7倍,中和活性(EC90)提高了41.3倍.结论:成功将表达原创性全人源抗人IgE的单链抗体(约25kDa)改造为亲和力及中和活性均大幅提升的全长抗体(约150kDa),获得2个候选细胞株