α-溶血素的表达及其纳米孔的制备

α-溶血素（α-hemolysin，αHL）是金黄色葡萄球菌分泌的一种水溶性穿孔毒素，在双脂膜上可组装成结构稳定的七聚体蛋白纳米孔，是理想的单分子检测器件。以大肠杆菌BL21（DE3）pLysS作为表达宿主菌株诱导表达野生型和单位点突变型α-溶血素，超滤膜分子截留法纯化蛋白质，使用兔血红细胞膜将αHL单体组装成七聚体蛋白纳米孔，并在人工脂双层膜上构建适于单分子分析的分子器件。通过溶血实验和单通道电流记录，证实αHL溶血活性良好，组装的αHL七聚体纳米孔在双脂膜上打孔能力和离子通透性良好，结构稳定，可作为理想的单分子检测器件。此方法为大量制备αHL单体及其在单分子分析和应用研究方面奠定了基础