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- 2005
RNase A及其链亲和素融合蛋白在pET系统中的表达Keywords: RNase A,原核表达,亲合纯化,蛋白复性 Abstract: 在大肠杆菌中用pET28a表达载体表达重组RNaseA。变性条件下,利用His-Resin亲和纯化,得到60mg／L电泳纯的RNaseA。纯化的RNaseA复性后,利用含大量RNA分子的碱法抽提质粒为底物,测定重组RNaseA活性,与商品化的RNaseA活性相当。同时在RNaseA活性测定体系中加入4mol／L尿素会使RNA分子切割效率提高10倍左右。在此基础上,成功表达RNaseA与链亲和素(streptavidjn)的融合蛋白,经纯化复性后,该融合蛋白同时具有核酸酶、biotin结合活性,在分子生物学中具有重要的应用价值
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