重组腺病毒介导自杀基因HSV1-tk转染内皮祖细胞的实验研究

摘 要:［目的］ 构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸腺激酶基因 (HSV1-tk）的重组腺病毒载体，并感染大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs），以期用于抗肿瘤血管生成的基因治疗及核素报告基因显像。［方法］ 从大鼠骨髓中分离、培养EPCs，利用流式细胞术进行鉴定。构建重组腺病毒载体Ad5-HSV1-tk-EGFP，并感染EPCs，以腺病毒Ad5-EGFP为对照。利用RT-PCR法、Western blot免疫印迹法检测HSV1-tk的表达，利用MTT法检测更昔洛韦(GCV)对病毒感染后EPCs的杀伤作用。［结果］ 流式细胞术结果显示从大鼠骨髓中分离出的EPCs阳性表达CD34(80.09%)和CD133(81.75%)，RT-PCR及Western blot免疫印迹结果显示HSV1-tk基因在转录及蛋白水平可以正确表达，MTT结果显示HSV-tk/GCV自杀基因系统对EPCs细胞具有明显的杀伤作用。［结论］ 重组腺病毒Ad5-HSV1-tk-EGFP感染EPCs后可以在细胞中成功表达，并且感染后自杀基因具有生物学活性，从而为利用EPCs作为载体进行肿瘤靶向基因治疗、报告基因显像提供实验依据