HPV16E7-HSP70 融合蛋白在大肠杆菌中表达及纯化

摘 要：［目的］ 在大肠杆菌中表达HPV16E7-HSP70 融合蛋白并进行纯化和复性，为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础。［方法］ 用构建的原核表达质粒pET28a HPV16E7-HSP70转化大肠杆菌BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达；通过超声波裂解细菌，高浓度尿素裂解包涵体和Ni2+离子金属螯合亲和层析纯化目的蛋白；并对融合蛋白进行复性；用SDS-PAGE及Western Blot进行分析鉴定。［结果］ SDS-PAGE分析显示有分子量约为90kD的融合蛋白表达，表达产物以包涵体形式存在，表达量可达30%；纯化后目的蛋白的纯度达到95%；经Western Blot鉴定复性后的融合蛋白能与抗HPV16E7抗体、抗HSP70抗体特异性结合。［结论］ HPV16E7-HSP70 融合蛋白能够在体外大肠杆菌中表达获得