粟酒裂殖酵母Cyc2定位及功能的研究

芽殖酵母中CYC2蛋白与Cyt c的装配有关,对线粒体功能的发挥十分重要. 但该蛋白在粟酒裂殖酵母中的同源蛋白Cyc2的功能还未可知,本文研究了粟酒裂殖酵母中Cyc2的定位及其对线粒体功能的影响. 构建Δcyc2菌株后观察其在甘油培养基上的表型,并构建回补菌株验证表型,结果发现Δcyc2在甘油板上表现出了生长缺陷; 通过检测Δcyc2菌株内由mtDNA编码的呼吸链蛋白的表达量,结果发现Cyc2的缺失并不会影响呼吸链蛋白的表达; 利用生物信息学分析Cyc2序列,发现它的N端含有一段线粒体定位序列(MTS)且该蛋白没有跨膜区域,为确定该蛋白在细胞中的具体定位,分别构建Cyc-GFP和Tom20-Flag/Cyc2-Myc菌株,通过荧光观察及生化方法确定该蛋白为线粒体内膜外周蛋白. 综上所述,粟酒裂殖酵母Cyc2为线粒体内膜外周蛋白,不会影响线粒体呼吸链蛋白的表达,可能通过其他途径参与线粒体功能的发挥