三疣梭子蟹Spook基因克隆及其表达分析

摘要 甲壳动物蜕皮激素（Ecdysteroids）主要在Y器官（YO）中合成与分泌，参与调控蜕皮、繁殖等多项生理活动。Spook基因编码的细胞色素P450（CYP）307a1是蜕皮激素合成通路早期的关键酶。为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用，采用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（RACE）技术，克隆得到了三疣梭子蟹Spook基因的全长cDNA序列（Gen-Bank 登录号：KM030021）。该序列全长为2 200 bp，包含一个长度为1 563 bp的开放阅读框，编码520个氨基酸；比对分析显示该氨基酸序列含helix-C、helix-K、helix-I、PERF、heme-binding 5个P450特征保守区域；系统进化树分析发现推导的三疣梭子蟹Spook蛋白与其他物种Spook聚为一支，而其他Halloween基因则分别聚为一支，表明推导的氨基酸确实是三疣梭子蟹Spook的蛋白序列。采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术分析了其在不同组织中的表达情况，结果显示Spook基因主要在三疣梭子蟹的YO中表达。在三疣梭子蟹的蜕皮周期中，Spook基因的表达水平自蜕皮后期（A、B期）逐渐上升，并在蜕皮间期（C期）上升至最大，随后在蜕皮前期逐渐下降至D3、D4亚期最低。研究结果表明Spook基因可能参与调控三疣梭子蟹的蜕皮过程