NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

摘要 旨在制备并鉴定抗人NT-proBNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-proBNP蛋白免疫Balb/c小鼠，取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合，经HAT筛选和有限稀释法亚克隆，获得阳性杂交瘤细胞株，用动物体内诱生法制备腹水，用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化，并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明，获得4株能稳定分泌抗人NT-proBNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类，1G12和1B2为IgG2a型，2D11为IgG1型，3D5为IgG2b型；1G12，1B2和3D5的抗体效价达到106，而2D11的效价仅达104。特异性好，1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012和6.33×1010。成功制备了特异性抗人NT-proBNP单克隆抗体