海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的整合及表达

摘要 采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme，SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys，将B. subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF036468)连接(P43-SjLys)。经BamH I/EcoR I酶切，将P43-SjLys片段连接到B. subtilis整合载体pDG1730上，构建整合重组质粒pDG-P43-SjLys。经Xho I酶切处理，线性化的pDG-P43-SjLys质粒转化B. subtilis WB600细胞。P43-SjLys片段通过同源双交换重组整合到B. subtilis WB600染色体上，成功得到具有稳定遗传的基因工程菌B. subtilis WB600/P43-SjLys。经SDS-PAGE和抑菌试验分析表明，培养60 h后，B. subtilis WB600/P43-SjLys能够表达可溶的，对常见的海洋细菌溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性的SjLys蛋白。首次在B. subtilis表达系统中得到可溶且具有酶活功能的SjLys蛋白，为SjLys的生产提出了一种具有可行性的和潜力的新方法